薄层虽小，事儿不少 ——小谈薄层检测注意事项_机构动态

薄层虽小，事儿不少 ——小谈薄层检测注意事项

发布时间：2020-09-22 15:04:55

薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，得出鉴别结果；亦可用薄层色谱仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。

常规薄层色谱由于具有同板同时可以检测多个样品，分析时间短，固定相相对廉价，即用即弃，不用担心样品中杂质的污染，检测不受溶剂的干扰，色谱的直观性强，可同板直观观察相互比较。但另一方面，因为它是一种“敞开系统”的色谱技术，与柱色谱的区别之一是除材料及器材以外，外界环境条件对被分离物质的色谱行为影响很大，被分离的物质色谱行为机制也很复杂；其次是由于分析的全过程是离线多步骤操作,所以操作技巧也明显的影响色谱质量。因而薄层色谱,尤其是常规薄层色谱,又被视为是一种较难驾驭的技术。为了充分发挥薄层色谱技术在中药分析方面的优势,提高色谱的分离度和重现性,注意控制影响色谱质量的因素是非常重要的。以下从薄层色谱操作过程细说注意点。

1.取样

大部分供试品使用干净的粉碎机粉碎即可；乌梅染色等需要整粒取样；如样品性状差异较大，需要独立取样，如降香等。

2.点样

除另有规定外,在洁净干燥的环境中,用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样仪点样于薄层板上。一般为圆点状或窄细的条带状,点样基线距底边10~15mm,高效板一般基线离底边8~10mm。圆点状直径一般不大于4mm.高效板一般不大于2mm。接触点样时注意勿损伤薄层表面。条带状宽度一般为5~10mm,高效板条带宽度一般为4-8mm,可用专用半自动或自动点样仪喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜,一般不少于8mm,高效板供试品间隔不少于5mm。

虽然鉴别不能也不应等同于定量测定，但在供试品溶液、对照药材溶液、化学对照品液均定量制备，在薄层板上定量点样，则样品得到的色谱不仅可以回答“有没有”和“是不是”（即真伪）的问题，还可以粗略地进行量化评价，在一定程度上提供“优劣”的信息。因此，点样时，样品和对照药材要尽量按照等量来进行。

3.展开

展开缸日常用的最多的是直立式展开箱，分为平底展开缸和双槽展开缸。双槽展开箱具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开缸内相对湿度等优点。大多数中药样品适宜用直立式不饱合或部分饱和（展开前使溶剂蒸气在展开缸内扩散平衡一定时间）。

放置过的硅胶薄层板，在使用前需105℃活化处理并放置在干燥器内。为了不同实验室之间及不同季节均可重现试验结果，应尽可能在相对湿度及温度可控的条件下展开，并记录实际的相对湿度和温度。可在双槽展开缸的一侧槽中加入适当浓度的硫酸来控制湿度：

相对湿度	所需硫酸浓度（v/v）
相对湿度	硫酸（ml）	水（ml）
18%	100	95.5
32%	68	100
42	57	100
47	50	100
58	39.5	100
65	34	100
72	27.5	100
88	10.8	100

如需饱和展开，则展开缸内壁放同样大小的滤纸，促使缸内尽快达到饱和状态。

展开注意事项：①展开剂的配比要准确、经济，展开剂距离原点5mm左右为宜；②部分品种的展开剂较特殊，如取混合溶剂的上层/下层溶液，氨蒸气饱和等；③一般高沸点的、含酸碱的溶剂展开速度较慢，需要有耐心；④展开距离默认8cm，根据具体品种可以适当减少或增加，有必要时可以放置冰箱内低温展开，展开剂不可多次重复使用。

4.显色与检视

薄层板展开完毕后，大多需要用显色剂使展开后的斑点显色，通常使用最多的是喷雾法，喷雾法用的喷雾瓶能在一定压力下使试剂喷成均匀的细雾状。观察薄层色谱用的紫外光灯装有长波（365nm）和短波段（254 nm）紫外光管两种。前者用于观察具有荧光的色谱，后者一般用于观察硅胶GF254板在荧光背景下的荧光猝灭暗色斑点。

注意事项：①显色剂配制方法、浓度等要符合药典要求，每种显色剂要单独保存，避免交叉使用同一个喷雾瓶；②喷显色剂时要均匀，避免出现局部区域湿透的现象，操作过程注意保护好自己；③薄层板加热时间要合适，至斑点清晰，薄层板干净利索。

色谱斑点本身有颜色者,可直接在日光下观察可见光谱;斑点在紫外光激发下可发射荧光者,可直接在紫外光灯下观察荧光色谱，检视前注意吹干或烘干溶剂。