杀菌设备效果评价方案及验证

杀菌设备效果评价方案及验证

西安国联质量检测技术股份有限公司

食品事业部：淮瑞娟

1 检测步骤
1.1  细菌
菌液制备：将菌株于接种于LB平板，36℃培养24h，挑取菌落于0.85%无菌生理盐水中，稀释浓度至10⁵~10⁶CFU/mL。
  在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mL营养琼脂，倒置冷却后吸取200μL菌液于营养琼脂涂布。将涂布好的培养基用紫外灯、臭氧发生器和负离子发生器同时处理48h，后用高温蒸汽喷枪高温处理7~10min，以未处理含菌平板为对照，36℃恒温培养48h，3次重复，以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=（对照菌浓度-处理后菌浓度）/对照菌浓度×100。
1.2  真菌
孢子悬浮液制备：将菌株于接种于PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂），28℃培养，待产孢后，将菌丝刮取于无菌蒸馏水中，充分摇匀后用无菌脱脂棉进行过滤得到孢子悬浮液，并用血球计数板调节浓度至10⁵~10⁶CFU/mL。
  在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mLPDA培养基，倒置冷却后吸200μL取孢子悬浮液于PDA培养基涂布。对含菌平皿进行消杀处理，处理方法同1.1，以未处理含菌平板为对照，25℃恒温培养3d，3次重复，以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=（对照菌浓度-处理后菌浓度）/对照菌浓度×100。
1.3 蟑螂
  将20只活体蟑螂置于130mm×130mm的方形培养皿，进行消杀处理，处理方法同1.1，以未处理蟑螂为对照，3次重复，以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=（对照活体蟑螂数-处理后活体蟑螂数）/对照活体蟑螂数×100。
1.4 蟑螂卵
  将15枚置于130mm×130mm的方形培养皿，进行消杀处理，处理方法同1.1，以未
处理蟑螂卵为对照，28℃恒温培养，3次重复，处理后连续观察蟑螂卵的孵化状态，以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=（对照蟑螂孵化数-处理后蟑螂孵化数）/对照蟑螂孵化数×100。
1.5 草履虫
  在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mL含草履虫水样，处理方法同1.1，以未处理草履虫为对照，3次重复，处理后在显微镜下观察草履虫存活状态（30个视野），以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=（对照活体草履虫数-处理后活体草履虫数）/对照活体草履虫数×100。注：活体草履虫数的个数为显微镜一个视野下的个数。
1.6 绿藻
  将球形绿藻置于130mm×130mm培养皿，进行消杀处理，处理方法同1.1，以未处理绿藻为对照，3次重复，处理后连续观察绿藻的存活状态，以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
1.7 小球藻
  在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mL含小球藻水样，处理方法同1.1，以未处理小球藻为对照，3次重复，处理后在显微镜下观察小球藻存活状态（30个视野），以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=（对照活体小球藻数-处理后活体小球藻数）/对照活体小球藻数×100。
2 结果与分析
2.1 真菌
  由表1可知，该设备对黄曲霉、黑曲霉、白色念珠菌、鲁氏毛霉和青霉的消杀率均为100%。试验结果表明，该设备能完全杀灭黄曲霉、黑曲霉、白色念珠菌、鲁氏毛霉和青霉。

菌株	对照菌浓度(cfu/g)	处理后菌浓度(cfu/g)	消杀率(%)
黄曲霉 Aspergillus flavus	>2×104	0	100
黑曲霉 Aspergillus niger	>2×104	0	100
白色念珠菌 Monilia albican	>2×104	0	100
鲁氏毛霉 Mucor roxianus	>2×104	0	100
青霉 Penicillium citrinum	>2×104	0	100

注：白色念珠菌和黑曲霉未经高温蒸汽消杀。
2.2 细菌
  由表2可知，该设备对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌的消杀率均为100%，对沙门氏菌、志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和粪链球菌的消杀率分别为99.98%、99.88%、99.97%和99.99%。试验结果表明，该设备能完全杀灭金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌，其次为粪链球菌、沙门氏菌和志贺氏菌，对鼠伤寒沙门氏菌的消杀率略低但均在99%以上。

菌株	对照菌浓度(cfu/g)	处理后菌浓度(cfu/g)	消杀率(%)
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus	>2×104	0	100
沙门氏菌 Salmonella spp.	>2×104	5	>99.98
志贺氏菌 Shigella spp.	>2×104	25	>99.88
铜绿假单胞杆菌 Pseudomonas aeruginosa	>2×104	1	100
鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium	>2×104	6	>99.97
粪链球菌 Enterococcus faecalis	>2×104	2	>99.99

注：金黄色葡萄球菌未经高温蒸汽消杀。
2.3 蟑螂
  经消杀后蟑螂全部死亡，消杀率为100%（表3）。试验结果表明，该设备对蟑螂的消杀效果强，能完全杀死活体蟑螂。

项目	对照活体蟑螂数(只)	处理后活体蟑螂数(只)	消杀率(%)
樱桃红蟑螂	20	0	100

2.4 蟑螂卵
  经高温消杀后对蟑螂卵28℃恒温培养连续观察孵化情况，对照蟑螂卵不断有蟑螂孵出，处理后蟑螂卵无蟑螂孵出。试验结果表明，该设备能完全杀死蟑螂卵，抑制蟑螂的孵化，对蟑螂卵的消杀率为100%。
2.5 绿藻
  经消杀后对绿藻连续观察，绿藻均变黄萎蔫停止生长，后逐渐死亡。试验结果表明，该设备能完全杀灭绿藻，抑制绿藻的生长，消杀率为100%。
2.6 草履虫
  经消杀后水中出现大量白色沉淀物，在显微镜下连续观察30个视野，发现无完整形态草履虫存在，呈破碎状态。试验结果表明，该设备能完全杀灭草履虫，并使其细胞解体，消杀率为100%。
2.7 小球藻
  经消杀后水中出现大量浅绿色沉淀物，在显微镜下连续观察30个视野，发现完整形态的小球藻明显减少，消杀率为91.81%（表4）。试验结果表明，该设备对小球藻的消杀效果良好，可杀灭90%以上的小球藻，并使其细胞解体。

项目	对照活体小球藻数(个)	处理活体小球藻数(个)	消杀率(%)
小球藻	293	24	91.81

注：活体小球藻数的个数为显微镜一个视野下的个数。
3 注意事项
3.1 试验中使用的设备会产生大量的臭氧，试验需要做好防护。
3.2 试验中使用到致病菌，试验完毕后所有物品必须经过灭菌处理。

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