生物样品中氨基酸含量检测

【案例简介】

一、实验原理

   斯坦德检测中心参照国标GB/T 5009.124-2003食品中氨基酸的测定，试样蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸自动分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。

二、仪器和试剂

   L-8900氨基酸自动分析仪，DHG-9203J型恒温干燥箱，DZF-6050型真空干燥器，真空泵；高纯氮气（纯度为99.99%）。

三、试验方法

1、称样

   样品经粉碎后，用电子天平准确称量样品，精确到0.0001g（使样品蛋白质含量10mg~20mg范围内），将称好的样品放于水解管中。

2、水解

   在水解管中加入6mol/L盐酸15mL，加入新蒸馏的苯酚3~4滴，再将水解管放入冰水中，冰冻3~5min，再接到真空泵的抽气管上，抽完真空后冲入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充满氮气的状态下封口。将已封口的水解管放在110℃±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出，冷却。

   打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50mL容量瓶内，用去离子水定容，吸取滤液1mL于5mL容量瓶内，用真空干燥器在40℃~50℃干燥，残留物用1~2mL水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mLpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。

四、结果计算与评价

   斯坦德检测中心利用外标法计算各种氨基酸含量。