一种简便测定小鼠耗氧量的实验方法

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一种简便测定小鼠耗氧量的实验方法

西安国联质量检测技术股份有限公司

安评中心：苏敏

1引言
小鼠在密闭的缺氧瓶内不断消耗氧气，而产生CO₂，CO₂被缺氧瓶中的钠石灰所吸收，瓶内氧分压逐渐降低而产生负压，缺氧瓶与水减压计接通，由于负压吸引将水柱内侧液面上升。及时由滴定管中滴入一定水，使水减压计恢复至原先的压力水平,保持小鼠处于常压状态下,记录所滴入装置中的水容积，以此表示在一定时间内，小鼠吸取的O₂的容积。黄芪是经典的补气药,具有利尿,强壮,降压,提高机体免疫功能等作用。本实验通过黄芪降低耗氧量的实验研究，介绍了小鼠整体耗氧量的测定的装置。
2材料与方法
2.1材料
动物：小鼠，体重18～22g，雌雄均有。器材：小鼠氧耗量装置（125ml缺氧瓶，200ml具塞广口瓶和微量滴定管,水减压计），秒表。药品及试剂：黄芪水煎液（2g/ml），普萘洛尔，钠石灰，凡士林。
2.2方法
2.2.1分组及给药
选取体重18～22g健康小鼠48只，雌雄兼用，分别称重，编号，按体重和性别均分为4组: 生理盐水组,黄芪水煎液组,普萘洛尔组。生理盐水组小鼠每只腹腔注射等容量的生理盐水，黄芪水煎液组每只腹腔注射黄芪水煎液3g/kg，每只皮下注射ISP20mg/kg;普萘洛尔组，每只皮下注射普萘洛尔30 mg/kg。
2.2.2测定方法
在室温25℃条件下，将微量滴定管及通气管插入200ml具塞广口瓶内；125ml缺氧瓶内，插上水减压计；用导管将缺氧瓶与广口瓶相接，如图1所示。
20～45分钟后，测定小鼠5分钟内的耗氧量。将小鼠放入缺氧瓶内，盖好盖子，关闭与大气相通的地方（空气入口处和滴定管活塞，水减压计开口处），通入空气，此时水减压计的压力即为常压状态下的压强。立即停止通气，此时开始记录时间，当小鼠呼出的CO₂，被钠石灰吸收时，装置内的气体容积减少，水减压计压力降低，及时从滴定管加水至装置中,使水减压计恢复至常压状态下压强。由滴定管放入装置中的水容积，即代表5分钟内该小鼠吸取O₂的容积，可以毫升表示，从而判断药物有无降低机体的氧耗量作用。                                                                                                                                                                                                                                                                                                                     

图1 氧耗量测定装置

1.缺氧瓶2.水减压计3.滴定管4.广口瓶

3结果
普萘洛尔和黄芪水煎液组耗氧率显著降低，黄芪组的耗氧量降低幅度稍弱于普萘洛尔组。
    表1  黄芪水煎液对小鼠整体耗氧量的影响（[img=,14,18]file:///C:\Users\ADMINI~1\AppData\Local\Temp\ksohtml\wpsF5F9.tmp.png[/img]±ѕ， n=10）

组别	剂量(mg/kg)	5分钟累积耗氧量（ml/只）
生理盐水	10	5.43±0.33
普萘洛尔组	30	3.2±0.55**
黄芪水煎液	3000	4.25±0.42**

与生理盐水组比较：^*P<0.05，^**P<0.01
4讨论
本文介绍一种在缺氧实验及抗心肌缺氧药物筛选中简易的方法，所用装置使用方便，耗资少。测定装置各接口处应密封无漏气，可涂少许凡士林于口密封。实验测氧耗量时，计时应准确。动物体重、室温、玻瓶容积等因素对实验结果有一定影响，实验中应加以控制。当小鼠耗氧量较多时，由于水比重小，水很容易通过虹吸现象进入缺氧瓶内，影响实验的进行。因此，连接缺氧瓶与广口瓶的导管不应离液面太近。应及时补充滴入水。由于钠石灰吸收CO₂会饱和，每测定1只小鼠要换钠石灰，否则影响实验结果准确性。小鼠整体氧耗量测定还可用小鼠放在密封小瓶内，通过连接测氧仪测定氧耗量。各组实验在一个时间段内进行。也可以用测氧仪来测耗氧量。

参考文献陈奇．中药药理研究方法学．北京：人民卫生出版社，2006：782．